Produkte

Proteïenfosforilering reguleer diverse sellulêre funksies en speel 'n sleutelrol in die vroeë ontwikkeling van plante.Om vorige ondersoeke van proteïenfosforilering in Arabidopsis-saailinge aan te vul en uit te brei, het ons 'n alternatiewe benadering gebruik wat proteïenekstraksie onder nie-denaturerende toestande kombineer met geïmmobiliseerde metaal-ioon affiniteitschromatografie (IMAC) verryking van ongeskonde fosfoproteïene in Rubisco-uitgeputte ekstrakte, gevolg deur identifikasie. deur gebruik te maak van tweedimensionele jelelektroforese (2-DE) en vloeistofchromatografie-tandem massaspektrometrie (LC-MS/MS).In-gel tripsien vertering en ontleding van geselekteerde gel kolle het 144 gefosforileerde peptiede en residue geïdentifiseer, waarvan slegs 18 fosfopeptiede en 8 fosfosiete gevind is in die PhosPhAt 4.0 en P3DB Arabidopsis thaliana fosforilasie terrein databasisse.Meer as die helfte van die 82 geïdentifiseerde fosfoproteïene was betrokke by koolhidraatmetabolisme, fotosintese/respirasie of oksidatiewe stres reaksie meganiese sms.Verryking van ongeskonde fosfoproteïene voor 2-DE en LC-MS/MS blyk die opsporing van gefosforileerde treonien- en tirosienreste te verbeter in vergelyking met metodes wat peptiedvlak-verryking gebruik, wat daarop dui dat die twee benaderings ietwat komplementêr is in terme van fosforileringsplekdekking.Deur resultate vir jong saailinge te vergelyk met dié wat voorheen vir volwasse Arabidopsis-blare verkry is, is vyf proteïene geïdentifiseer wat differensieel in hierdie weefsels gefosforileer is, wat die potensiaal van hierdie tegniek demonstreer om die dinamika van proteïenfosforilering tydens plantontwikkeling te ondersoek.