Produkte

Die ORF45-proteïen van Kaposi se sarkoom-geassosieerde herpesvirus (KSHV) is 'n gammaherpesvirus-spesifieke onmiddellike-vroeë tegumentproteïen.Ons vorige studies het sy deurslaggewende rolle in beide vroeë en laat stadiums van KSHV-infeksie aan die lig gebring.In hierdie studie het ons die interaktoom van ORF45 ondersoek deur 'n paneel monoklonale teenliggaampies te gebruik.Benewens die voorheen geïdentifiseerde ekstrasellulêre gereguleerde kinase (ERK) en p90 ribosomale S6 kinase (RSK) proteïene, het ons verskeie ander saamgesuiwerde proteïene gevind, insluitend prominentes van ~38 kDa en ~130 kDa.Massaspektrometrie het aan die lig gebring dat die 38-kDa-proteïen virale ORF33 is en die 130-kDa-proteïen sellulêre USP7 is (ubiquitien-spesifieke protease 7).Ons het die ORF33-bindende domein gekarteer na die hoogs gekonserveerde karboksielterminale 19 aminosure (aa) van ORF45 en die USP7-bindende domein na die gerapporteerde konsensusmotief in die sentrale streek van ORF45.Deur immunofluoressensiekleuring te gebruik, het ons kolokalisasie van ORF45 met ORF33 of USP7 waargeneem, beide onder getransfekteerde toestande en in KSHV-geïnfekteerde selle.Verder het ons ORF45-afhanklike herlokalisering van 'n gedeelte van ORF33/USP7 vanaf die kern na die sitoplasma opgemerk.Ons het gevind dat ORF45 'n toename in ORF33-proteïenakkumulasie veroorsaak het wat afgeskaf is indien óf die ORF33- óf USP7-bindende domein in ORF45 geskrap is.Verder het delesie van die gekonserveerde karboksielterminus van ORF45 in die KSHV-genoom die vlak van ORF33-proteïen in KSHV-geïnfekteerde selle drasties verminder en produksie van nageslagvirions afgeskaf.Gesamentlik openbaar ons resultate nie net nuwe komponente van die ORF45-interaktoom nie, maar demonstreer ook dat die interaksies tussen hierdie proteïene deurslaggewend is vir KSHV-litiese replikasie. Kaposi se sarkoom-geassosieerde herpesvirus (KSHV) is die veroorsakende middel van verskeie menslike kankers.KSHV ORF45 is 'n multifunksionele proteïen wat benodig word vir KSHV-litiese replikasie, maar die presiese meganismes waardeur ORF45 sy kritieke funksies verrig is onduidelik.Ons vorige studies het aan die lig gebring dat alle ORF45-proteïen in selle in hoë-molekulêre gewig komplekse bestaan.Ons het dus gepoog om die interaktoom van ORF45 te karakteriseer om insigte te verskaf in sy rolle tydens litiese replikasie.Met behulp van 'n paneel van monoklonale teenliggaampies het ons die ORF45-interaktoom in KSHV-geïnfekteerde selle ondersoek.Ons het twee nuwe bindingsvennote van ORF45 geïdentifiseer: die virale proteïen ORF33 en sellulêre ubiquitien-spesifieke protease 7 (USP7).Ons demonstreer verder dat die interaksie tussen ORF45 en ORF33 noodsaaklik is vir die doeltreffende produksie van KSHV virale deeltjies, wat daarop dui dat die geteikende inmenging met hierdie interaksie 'n nuwe strategie kan verteenwoordig om KSHV-litiese replikasie te inhibeer.