Produkte

Soortgelyk aan ander positiewe-string RNA-virusse, word tombusvirusse gerepliseer deur die membraangebonde virale replikase-kompleks (VRC).Die VRC bestaan ​​uit die p92-virusgekodeerde RNA-afhanklike RNA-polimerase (RdRp), die virale p33 RNA-chaperone en verskeie gekoöpteerde gasheerproteïene.Om 'n funksionele RdRp te word na sy translasie, moet die p92 replikasieproteïen in die VRC geïnkorporeer word, gevolg deur die aktivering daarvan.Ons het voorheen in 'n selvrye gisekstrak-gebaseerde toets gewys dat die aktivering van die Tomato Bushy stuntvirus (TBSV) RdRp 'n oplosbare gasheerfaktor(e) vereis.In hierdie artikel identifiseer ons die sellulêre hitteskokproteïen 70 (Hsp70) as die gekoöpteerde gasheerfaktor wat nodig is vir die aktivering van 'n N-terminaal afgeknotte rekombinante TBSV RdRp.Daarbenewens inhibeer klein-molekule-gebaseerde blokkering van Hsp70-funksie RNA-sintese deur die tombusvirus RdRp in vitro.Verder toon ons dat neutrale fosfolipiede, naamlik fosfatidieletanolamien (PE) en fosfatidielcholien (PC), RdRp aktivering in vitro verbeter.Daarenteen toon fosfatidielgliserol (PG) 'n sterk en dominante inhiberende effek op in vitro RdRp aktivering.Ons demonstreer ook dat PE en PC RdRp-virale plus-string RNA [(+)RNA] interaksie stimuleer, terwyl PG die binding van die virale RNA aan die RdRp inhibeer.Gebaseer op die stimulerende versus inhiberende rolle van verskeie fosfolipiede in tombusvirus RdRp-aktivering, stel ons voor dat die lipiedsamestelling van geteikende subsellulêre membrane deur tombusvirusse gebruik kan word om nuwe VRC-samestelling gedurende die verloop van infeksie te reguleer. Die virusgekodeerde RNA-afhanklike RNA-polimerase (RdRp), wat verantwoordelik is vir die sintetisering van die virale RNA-nageslag in geïnfekteerde selle van verskeie positiewe-string RNA-virusse, is aanvanklik onaktief.Hierdie strategie sal waarskynlik virale RNA-sintese in die sitosol vermy wat vinnig sal lei tot induksie van RNA-geaktiveerde sellulêre antivirale response.Tydens die samestelling van die membraangebonde replikasekompleks word die virale RdRp geaktiveer deur 'n onvolledig verstaande proses wat die RdRp in staat maak tot RNA-sintese.Deur TBSV RdRp te gebruik, wys ons dat die gekoöpteerde sellulêre Hsp70 chaperone en neutrale fosfolipiede RdRp aktivering in vitro fasiliteer.Daarteenoor het fosfatidielgliserol (PG) 'n dominante inhiberende effek op in vitro RdRp-aktivering en RdRp-virale RNA-interaksie, wat daarop dui dat die membraneuse mikrodomein wat die RdRp omring, sy vermoë vir RNA-sintese grootliks beïnvloed.Dus, die aktivering van die virale RdRp hang waarskynlik af van veelvuldige gasheerkomponente in geïnfekteerde selle.