Produkte

Die wyse waarop effekte van gelyktydige mutasies kombineer om ensiematiese aktiwiteit te verander, is nie maklik voorspelbaar nie omdat hierdie effekte nie altyd op 'n lineêre wyse byvoeg nie.Gevolglik kan die karakterisering van die effekte van gelyktydige mutasies van aminosuurreste wat die substraat bind 'n beduidende bydrae lewer tot die begrip van die substraat-spesifisiteit van ensieme.In die beta-glikosidase van Spodoptera frugiperda (Sfbetagly), is beide residue Q39 en E451 in wisselwerking met die substraat en dit is noodsaaklik om substraat spesifisiteit te definieer.Dubbelmutante van Sfbetagly (A451E39, S451E39 en S451N39) is voorberei deur plekgerigte mutagenese, uitgedruk in bakterieë en gesuiwer deur gebruik te maak van affiniteitschromatografie.Hierdie ensieme is gekenmerk deur p-nitrofeniel beta-galaktosied en p-nitrofeniel beta-fukosied as substrate te gebruik.Die k kat/Km-verhouding vir enkel- en dubbelmutante van Sfbetagly-bevattende plekgerigte mutasies by posisies Q39 en E451 is gebruik om te demonstreer dat die effek op die vrye energie van ES-dubbeldolk (ensiem-oorgangstoestandkompleks) van die dubbelmutasies (Gdouble) daggerxy) is nie die som van die effekte wat voortspruit uit die enkele mutasies (Gdouble daggerx en Gdouble daggery).Hierdie verskil in Gdouble dolk dui aan dat die effekte van die enkele mutasies gedeeltelik oorvleuel.Daarom tel hierdie algemene effek slegs een keer in Gdouble dolkxy.Kristallografiese data op beta-glikosidases toon die teenwoordigheid van 'n tweetandige waterstofbinding wat residue Q39 en E451 en dieselfde hidroksielgroep van die substraat behels.Daarom dui beide termodinamiese en kristallografiese data daarop dat residue Q39 en E451 'n wedersydse invloed uitoefen op hul onderskeie interaksies met die substraat.