Produkte

Ons het onlangs gerapporteer dat pireennukleotied verkieslik teenoor 'n abasiese plek, die 3'-T van 'n timiendimeer, en mees onbeskadigde basisse deur gis-DNA-polimerase eta (pol eta) ingevoeg word.Omdat pireen 'n nie-polêre molekule is met geen H-bindingsvermoë nie, word die buitengewone hoë doeltreffendheid van dPMP-insersie toegeskryf aan sy superieure basisstapelingsvermoë, en onderstreep die belangrikheid van basisstapeling in die seleksie van nukleotiede deur pol eta.Om die rol van H-binding en basispaargeometrie in die seleksie van nukleotiede deur pol eta te ondersoek, het ons die invoegingsdoeltreffendheid van die basisgemodifiseerde nukleotiede 2,6-diaminopurien, 2-aminopurien, 6-chloropurien en inosien bepaal wat sou maak 'n ander aantal H-bindings met die sjabloonbasis, afhangende van basispaargeometrie.Watson-Crick basisparing blyk 'n belangrike rol te speel in die seleksie van nukleotiedanaloë vir invoeging teenoor C en T soos blyk uit die afname in die relatiewe invoegingsdoeltreffendheid met 'n afname in die aantal Watson-Crick H-bindings en 'n toename in die aantal skenker-skenker en aanvaarder-aanvaarder-interaksies.Die selektiwiteit van nukleotied-insersie is groter teenoor die 5'-T as die 3'-T van die timiendimeer, in ooreenstemming met vorige werk wat daarop dui dat die 5'-T meer rigied gehou word as die 3'-T.Verder blyk invoeging van A teenoor beide T's van die dimeer bemiddel te word deur Watson-Crick basisparing en nie deur Hoogsteen basisparing gebaseer op die byna identiese invoegingsdoeltreffendheid van A en 7-deaza-A, waarvan laasgenoemde nie H- het nie. bindingsvermoë by N7.Die relatiewe doeltreffendheid vir die invoeging van nukleotiede wat Watson-Crick basispare kan vorm, is parallel met dié vir die Klenow-fragment, terwyl die Klenow-fragment sterker diskrimineer teen wanpassings, in ooreenstemming met sy groter vormselektiwiteit.Hierdie resultate onderstreep die belangrikheid van H-binding en Watson-Crick basispaar geometrie in die seleksie van nukleotiede deur beide pol eta en die Klen ow fragment, en die minder rol van vorm seleksie in invoeging deur pol eta as gevolg van die meer oop en minder beperkte aktiewe webwerf.