Produkte

Om spesifiek verskeie metaboliete van 5-fluorouracil (5-FU) en twee endogene monofosfaatnukleotiede te kwantifiseer, het ons 'n oorspronklike metode ontwikkel gebaseer op 'n vloeistofchromatografie-tandem massaspektrometrie (LC-MS/MS).Hierdie toets het die bepaling moontlik gemaak van: (i) die intrasellulêre produksie van 5-fluoro-2'-deoksiuridien-5'-monofosfaat (5-FdUMP) vanaf 5-FU of 5-fluoro-2'-deoksiuridien (5-FdUrd) , (ii) die impak van 5-FdUMP-konsentrasie op die intrasellulêre 2'-deoksiuridien-5'-monofosfaat (dUMP)/timidine-5'-monofosfaat (TMP) verhouding, en (iii) die afskeidingsgraad van 5-FdUMP en 5-FU van menslike gekweekte selle deur ABC-vervoerders.Onder ons eksperimentele toestande is selle met 5-FU of 5-FUrd geïnkubeer.Daarna is sellulêre proteïene deur metanol gepresipiteer.Hierdie prosedure het hoë ekstraksieherwinning verskaf.Daarbenewens, om 5-FU en 5-FdUMP afskeiding van selle te meet, het ons kwantifisering van hierdie molekules in kultuurmedium uitgevoer.Media is óf direk ingespuit (5-FU) óf onder het 'n vastefase-ekstraksie deur gebruik te maak van Oasis Wax-ekstraksiepatroon (5-FdUMP).Skeiding van analiete is uitgevoer op 'n dC18 Atlantis 3.5 μm, (100 mm × 2.1 mm id) kolom met isokratiese modus deur ammoniumformiaatbuffer/metanol/water (5/5/90, v/v) as mobiele fase te gebruik.Die looptyd het nie 6,2 min oorskry nie.Die analiete is in 'n elektrosproei-koppelvlak onder negatiewe ioonmodus geïoniseer.Ons het die metode bekragtig oor 'n reeks van 2.5-150 ng mL -1 volgens die verbindings.Intra- en intertoetsveranderlikheid was laer as 10% oor sewe dae.Alle verbindings was stabiel in selle of in kultuurmedium wanneer monsters vir ten minste twee weke by -20 °C gestoor is, en na drie vries-ontdooi-siklusse.Geen matriks effek is in beide media waargeneem nie.