Produkte

Die membraantopologie van die kolisien E1-kanaaldomein is bestudeer deur fluoressensie-resonansie-energie-oordrag (FRET).Die FRET het 'n geneties gekodeerde fluoresserende aminosuur (kumarien) as die skenker behels en 'n selektief gemerkte sisteïenresidu vasgemaak met DABMI (4-(dimetielamino)fenielasofeniel-4'-maleïmied) as die FRET-ontvanger.Die fluoresserende kumarienresidu is in die proteïen geïnkorporeer via 'n ortogonale tRNA/aminoasiel-tRNA sintetasepaar wat selektiewe inkorporasie in enige plek binne die kolisienkanaaldomein moontlik gemaak het.Elke variant het 'n stop (TAG) mutasie vir kumarien inkorporasie en 'n sisteïen (TGT) mutasie vir DABMI aanhegting gehuisves.Ses interheliese afstande binne helikse 1-6 is bepaal deur gebruik te maak van FRET-analise vir beide die oplosbare en membraangebonde toestande.Die FRET-data het groot veranderinge in die interheliese afstande tussen helikse 3-6 getoon na membraanassosiasie wat nuwe insig verskaf in die membraangebonde struktuur van die kanaaldomein.Oor die algemeen het die kumarien-DABMI FRET interheliese doeltreffendheid afgeneem met membraanbinding, wat voortbou op die sambreelmodel vir die kolisienkanaal.'n Tentatiewe model vir die geslote toestand van die kanaaldomein is ontwikkel gebaseer op huidige en voorheen gepubliseerde FRET-data.Die model stel sirkelvormige rangskikking van helikse 1-7 voor in 'n kloksgewyse rigting vanaf die ekstrasellulêre kant en membraangrensvlakassosiasie van helikse 1, 6, 7 en 10 rondom die sentrale transmembraan-haarnaald wat deur helikse 8 en 9 gevorm word.