Produkte

Die ontleding van proteoomwye fosforileringsgebeure is steeds 'n groot analitiese uitdaging vanweë die enorme kompleksiteit van proteïenfosforileringsnetwerke.In hierdie werk evalueer ons die komplementariteit van Lys-N, Lys-C en tripsien met betrekking tot hul vermoë om by te dra tot die globale analise van die fosfoproteoom.'n Verfynde weergawe van lae-pH sterk katioonuitruiling is gebruik om N-terminaal geasetyleerde, gefosforileerde en nie-gemodifiseerde peptiede doeltreffend te skei.'n Totaal van 5036 nie-oortollige fosfopeptiede kon geïdentifiseer word met 'n vals ontdekkingskoers van <1% vanaf 1 mg proteïen deur 'n kombinasie van die drie ensieme te gebruik.Ons data het aan die lig gebring dat die oorvleueling tussen die fosfopeptieddatastelle gegenereer met verskillende proteases marginaal was, terwyl die oorvleueling tussen twee soortgelyk gegenereerde triptiese datastelle ten minste 4 keer hoër gevind is.Op hierdie manier het die parallelle gebruik van Lys-N en tripsien 'n 72% toename in die aantal bespeurde fosfopeptiede moontlik gemaak in vergelyking met tripsien alleen, terwyl 'n tripsien-herhalingseksperiment slegs tot 'n 25% toename gelei het.Dus, toe ons slegs op die tripsien- en Lys-N-data gefokus het, het ons 4671 nie-oortollige fosfopeptiede geïdentifiseer.Verdere ontleding van die bespeurde terreine het getoon dat die Lys-N en tripsien datastelle verryk is in aansienlik verskillende fosforileringsmotiewe, wat verder bewys dat multiprotease benaderings baie waardevol is in fosfoproteoom analises.