Produkte

Nuwe hoëprestasie vloeistofchromatografie-toets vir glikosieltransferases gebaseer op derivatisering met antranielsuur en fluoressensie-opsporing.

Toetse is ontwikkel deur gebruik te maak van die unieke etiketteringchemie van 2-aminobensoësuur (2AA; antranielsuur, AA) vir die meting van aktiwiteite van beide β1-4 galaktosieltransferase (GalT-1) en α2-6 sialieltransferase (ST-6) deur hoëprestasie vloeistof chromatografie (HPLC) met fluoressensie opsporing (Anumula KR. 2006. Vooruitgang in fluoressensie derivatisering metodes vir hoë-prestasie vloeistofchromatografiese analise van glikoproteïen koolhidrate. Anal Biochem. 350:1-23).N-asetielglukosamien (GlcNAc) en N-asetiellaktosamien is as aanvaarders gebruik en uridiendifosfaat (UDP)-galaktose en sitidienmonofosfaat (CMP)-N-asetielneuramiensuur (NANA) as skenkers vir onderskeidelik GalT-1 en ST-6.Ensiematiese produkte is in situ met AA gemerk en is geskei van die substrate op TSKgel Amide 80 kolom deur gebruik te maak van normale fase toestande.Ensiemeenhede is uit die piekareas bepaal deur vergelyking met die gelyktydig gederivatiseerde standaarde Gal-β1-4GlcNAc en NANA-α2-6 Gal-β1-4GlcNAc.Lineariteit (tyd en ensiemkonsentrasie), akkuraatheid (intra- en intertoets) en reproduceerbaarheid vir die toetse is vasgestel.Daar is gevind dat die toetse nuttig is om die ensiemaktiwiteite tydens isolasie en suiwering te monitor.Die toetse was hoogs sensitief en het gelyk aan of beter as die tradisionele radioaktiewe suiker-gebaseerde metings uitgevoer.Die toetsformaat kan ook gebruik word vir die meting van die aktiwiteit van ander transferases, mits die koolhidraataannemers 'n verminderende punt vir etikettering bevat.'n Assay vir glikoproteïen-aannemers is ontwikkel met behulp van IgG.'n Kort HPLC-profileringsmetode is ontwikkel vir die skeiding van IgG-glikane (twee-antenne G0, G1, G2, mono- en gedisialileerd), wat die bepaling van GalT-1 en ST-6 aktiwiteite op 'n vinnige wyse vergemaklik het.Verder behoort hierdie profileringsmetode nuttig te wees om die veranderinge in IgG-glikane in kliniese omgewings te monitor.