Produkte

LecA (PA-IL) is 'n sitotoksiese lektien en adhesien wat deur Pseudomonas aeruginosa geproduseer word wat hidrofobiese galaktosiede met hoë spesifisiteit en affiniteit bind.Deur 'n lecA-egfp translasiefusie en immunoblot-analise van die biofilm ekstrasellulêre matriks te gebruik, wys ons dat lecA in biofilm-gegroeide selle uitgedruk word.In statiese biofilmtoetse op beide polistireen en vlekvrye staal, is biofilmdiepte en oppervlakbedekking verminder deur mutasie van lecA en versterk in die LecA-oorproduserende stam PAO-P47.Biofilm-oppervlakbedekking deur die ouerstam, PAO-P47, maar nie die lecA-mutant op staalkoepons nie, is ook geïnhibeer deur groei in die teenwoordigheid van óf isopropyl-beta-D-tiogalaktosied (IPTG) óf p-nitrofeniel-alfa-D-galaktosied ( NPG).Verder kan volwasse wildtipe biofilms gevorm in die afwesigheid van hierdie hidrofobiese galaktosiede versprei word deur die byvoeging van IPTG.Daarteenoor het byvoeging van p-nitrofeniel-alfa-L-fukose (NPF) wat 'n hoë affiniteit vir die P. aeruginosa LecB (PA-IIL) lekti n het geen effek op biofilm vorming of verspreiding gehad nie.Planktoniese groei van P. aeruginosa PAO1 is nie beïnvloed deur die teenwoordigheid van IPTG, NPG of NPF nie, en die stam was ook nie in staat om hierdie suikers as koolstofbronne te gebruik nie, wat daarop dui dat die waargenome effekte op biofilmvorming te wyte was aan die mededingende inhibisie van LecA-ligand bindend.Soortgelyke resultate is ook verkry vir biofilms wat onder dinamiese vloeitoestande op staalkoepons gekweek is, wat daarop dui dat LecA bydra tot P. aeruginosa biofilm-argitektuur onder verskillende omgewingstoestande.

'n Alfa-L-fukosidase (EC 3.2.1.51) wat die t-fukosielresidu van die syketting van xiloglukan-oligosakkariede kan vrystel, is in die blare van Arabidopsis-plante opgespoor.Verder, 'n alfa-L-fucosidase met soortgelyke substraat spesifisiteit is gesuiwer uit kool (Brassica oleracea) blare om 'n enkele band op SDS-PAGE weer te gee.Twee peptiedvolgordes is van hierdie proteïenband verkry, en hulle is gebruik om 'n Arabidopsis-geen te identifiseer wat kodeer vir 'n alfa-fucosidase wat ons voorstel om AtFXG1 te noem.Daarbenewens is 'n Arabidopsis-geen met homologie met bekende alfa-L-fucosidases ook gevind, en ons het voorgestel om dit as AtFUC1 te noem.Beide AtFXG1 en ATFUC1 is heteroloog uitgedruk in Pichia pastoris selle en die alfa-L-fucosidase aktiwiteite wat na die kultuurmedium afgeskei is.Die alfa-L-fucosidase wat deur AtFXG1 gekodeer is, was aktief teen die oligosakkariede van xyloglucan XXFG sowel as teen 2'-fukosiel-laktitol maar nie teen p-nitrofeniel-alfa-L-fukopiranosied nie.Die AtFUC1 wat heteroloog uitgedruk is, was egter slegs aktief teen 2'-fukosiellaktitol.Dus, eersgenoemde moet verband hou met xyloglukan metabolisme.